Uso da citometria de fluxo no diagnóstico sorológico da COVID-19 / The use of flow cytometry for the serological diagnosis of COVID-19

A pandemia da COVID-19 tem tido um impacto devastador em todo o mundo e levou ao rápido desenvolvimento de testes diagnósticos. Diferentes tecnologias vêm sendo utilizadas para a detecção de imunoglobulinas frente à infecção por SARS-CoV-2. Ensaios imunoenzimáticos (ELISA), quimioluminescentes e imunocromatográficos estão disponíveis e, no geral, apresentam poder diagnóstico limitado, principalmente para a detecção de IgA. A citometria de fluxo tem surgido como alternativa para o desenvolvimento de métodos sensíveis e específicos para a COVID-19 aplicados para diagnóstico, triagem e estratificação da doença. A citometria de fluxo é uma tecnologia óptica baseada em laser que detecta características físico-químicas de células ou partículas em um fluido heterogêneo. O artigo explora a citometria de fluxo para o diagnóstico da COVID-19 em duas estratégias para a detecção de anticorpos no soro ou plasma, uma utilizando antígenos virais expressos na superfície de células de mamíferos e outra com estes elementos imobilizados em microesferas (beads). A possibilidade de detecção rápida de múltiplos anticorpos simultaneamente, com pequeno volume de amostra e elevada sensibilidade e especificidade, torna a citometria de fluxo uma metodologia promissora para o laboratório clínico, como ferramenta de referência para auxiliar na contenção do processo pandêmico da COVID-19 e futuros eventos similares.

The COVID-19 pandemic has had a devastating impact around the world and has led to the rapid development of diagnostic tests. Different technologies have been used to detect immunoglobulins produced against SARS-CoV-2 infection. Immunoenzymatic (ELISA), chemiluminescent and immunochromatographic assays are available and, in general, they have limited diagnostic accuracy, especially for the detection of IgA. Flow cytometry has emerged as an alternative for the development of sensitive and specific methods for COVID-19 applied for diagnosis, screening and stratification of the disease. Flow cytometry is a laser-based optical technology that detects physicochemical characteristics of cells or particles in a heterogeneous fluid. The article explores flow cytometry for the diagnosis of COVID-19 in two strategies for detecting antibodies in serum or plasma, the first one using viral antigens expressed on the surface of mammalian cells and the other one with these elements immobilized on microspheres (beads). The possibility of rapid detection of multiple antibodies simultaneously, with a small sample volume and high sensitivity and specificity, makes flow cytometry a promising methodology for the clinical laboratory, as a reference tool to help stop the COVID-19 pandemic process and similar future events.

Evaluation of 1, 5 -Anhydroglucitol as a Biomarker for Type 2 Diabetes Mellitus in Patients without Overt Nephropathy

1,5-Anhydroglucitol (1,5-AG) is a non-fasting glycemic marker that responds to hyperglycemia excursions. The reduction in serum levels of 1,5-AG is associated with an increase in postprandial glycemia and glycosuria, phenomena that increase the risk and severity of diabetic complications. The objective is to assess the ability of 1,5-AG to discriminate type 2 diabetes (T2D) patients without overt kidney disease, for screening or diagnostic purposes. The Human Research Ethics Committee of Universidade Federal do Paraná (UFPR) approved the project. Serum samples from 567 individuals classified as healthy subjects (n = 291) and T2D (n = 276) with moderate glycemic control (HbA1c of 7-8%), matched by gender, were analyzed. Serum 1,5-AG levels were measured using an automated enzymatic method (GlycoMark, Inc.). Receiver Operating Characteristic (ROC) curve analysis for 1,5-AG showed sensibility of 65.3% and specificity of 91.1% to detect T2D at cut-off point of 92 µmol/L. The results were similar to the groups' discrimination by glycemia (sensibility/specificity, 62.2%; 89.0%) at cut-off point of 6.3 mmol/L. HbA1c was the best discriminator (sensibility/specificity, 87.4%; 94.2%) at a cut-off point of 5.8% (40 mmol/mol). The serum 1,5-AG concentration was not able to discriminate T2D in the presence of moderate glycemic control with no overt nephropathy.

Caracterização dos distúrbios da regulação ácido-base: uma abordagem didática e intuitiva / Characterization of acid-base regulation disorders: a didactic and intuitive approach

Em humanos, o pH sanguíneo é mantido em uma faixa estreita, entre 7,35 e 7,45. Diferentes mecanismos bioquímicos, de forma harmônica, atuam para a manutenção do pH fisiológico. Múltiplos processos patológicos podem promover alterações no pH e nos gases sanguíneos, caracterizando acidose (pH <7,35) ou alcalose (pH >7,45). A ruptura da homeostasia do pH é identificada pela medição do pH, pressão parcial de dióxido de carbono (pCO2), concentração do bicarbonato (HCO3-) e, adicionalmente, com a pressão de oxigênio (pO2) em sangue arterial, processo descrito como gasometria arterial. Este artigo revisa os principais elementos associados a compreensão das alterações e tem como objetivo central apresentar uma abordagem didática e intuitiva para a caracterização destes distúrbios; e também comenta sobre ferramentais digitais destinadas a interpretações das alterações da gasometria arterial que também são abordados, como programas para computadores em ambiente web e aplicativos para telefonia móvel.

In humans, blood pH is kept in a narrow range, between 7.35 to 7.45. Different biochemical mechanisms, in a harmonic way, act to maintain the physiological pH. Multiple pathological processes can promote changes in pH and blood gases, characterizing acidosis (pH <7.35) or alkalosis (pH> 7.45). The rupture of pH homeostasis is identified by measuring pH, partial pressure of carbon dioxide (pCO2), bicarbonate concentration (HCO3 - and, in addition, with the pressure of oxygen (pO2) in arterial blood, a process described as gasometry arterial. This article reviews the main elements associated with the understanding of acid-base changes and aims to present a didactic and intuitive approach to the characterization of these disorders; and also comments on digital tools for the interpretation of alterations in arterial blood gases are also covered, such as programs for computers in a web environment and applications for mobile phone.

COVID-19 e Diabetes: a relação entre duas pandemias distintas / COVID-19 and Diabetes: two distinct pandemics and their relationship

O mundo enfrenta duas pandemias distintas, mas que guardam alguma relação entre si. O Diabetes mellitus (DM) promove um estado crônico inflamatório que torna os afetados mais propensos a infecções em geral. A doença aguda causada pelo novo coronavírus, COVID-19, assim como o DM, altera o sistema imunológico, podendo ativar uma tempestade de citocinas deletéria ao hospedeiro. O DM tem sido considerado como um fator de risco independente da idade para a gravidade da COVID-19. De fato, pessoas com DM são propensas a um curso clínico de maior severidade da COVID-19 com maior taxa de morbimortalidade. Uma forte relação entre a COVID-19 e o DM reside no fato de que o SARS-CoV-2 utiliza a proteína ACE-2 como receptor para entrar na célula humana, a qual é superexpressa pelas células das ilhotas pancreáticas e ainda mais em pessoas com DM. Depois de invadir a célula do hospedeiro, o vírus degrada a ACE-2, reduzindo sua atividade anti-inflamatória. Somado a isso, acredita-se que o SARS-CoV-2 afete diretamente a parte endócrina do pâncreas, com consequente hiperglicemia. Entretanto, ainda não está claro de que forma as alterações glicêmicas podem estar relacionadas com a severidade da COVID-19; e se o SARS-CoV-2 tem potencial diabetogênico. Todavia, os mecanismos propostos para explicar a associação observada entre DM e a COVID-19 incluem inflamação, alterações na resposta imune, na coagulação e a agressão direta do vírus às células b pancreáticas. Como o diabetes está associado às manifestações graves da COVID-19, o primeiro passo é evitar a contaminação de pessoas com DM pelo SARS-CoV-2. Depois, todo paciente com COVID-19 que tenha DM deve ser considerado grave. E, por fim, a monitoração glicêmica frequente em pacientes com COVID-19 deve ser considerada, uma vez que o controle da hiperglicemia tem se mostrado eficaz na promoção de melhores desfechos clínicos.

The world faces two distinct pandemics, which have some relationship with each other. Diabetes mellitus (DM) promotes a chronic inflammatory state that makes the affected more prone to general infections. The acute disease caused by the new coronavirus, COVID19, as well as DM, alters the immune system, which can activate a harmful cytokine storm in the host. DM has been considered as an age-independent risk factor for the severity of COVID-19. In fact, people with DM are prone to a more severe clinical course of COVID19 with a higher rate of morbidity and mortality. A strong relationship between COVID-19 and DM lies in the fact that SARS-CoV-2 uses the ACE-2 protein as a receptor to enter the human cell, which is overexpressed by pancreatic islet cells, especially in people with DM. After invading the host cell, the virus degrades ACE-2, reducing its anti-inflammatory activity. In addition, SARS-CoV-2 is believed to directly affect the endocrine part of the pancreas, with consequent hyperglycemia. However, it is not clear how glycemic changes may be related to the severity of COVID-19; and, whether SARS-CoV-2 has diabetogenic potential. However, the mechanisms proposed to explain the observed association between DM and COVID-19 include inflammation, changes in the immune response, coagulation and direct aggression of the virus to pancreatic beta cells. As diabetes is associated with severe manifestations of COVID-19, the first step is to avoid contamination of people with DM by SARS-CoV-2. Then, every patient with COVID-19 who has DM should be considered severe. Finally, frequent glycemic monitoring in patients with COVID-19 should be considered, since the control of hyperglycemia has been shown to be effective in promoting better clinical outcomes

d-GDM: A mobile diagnostic decision support system for gestational diabetes

ABSTRACT Objective The aim of the study is to describe a portable and convenient software to facilitate the diagnostics of gestational (GDM) and pre-gestational diabetes (PGDM). Materials and methods An open source software, d-GDM, was developed in Java. The integrated development environment Android Studio was used as the Android operational system. The software for GDM diagnosis uses the criteria endorsed by the International Association of Diabetes and Pregnancy Study Group, modified by the World Health Organization. Results GDM diagnosis criteria is not simple to follow, therefore, errors or inconsistencies in diagnosis are expected and could delay the appropriate treatment. The d-GDM, was developed to assist GDM diagnosis with precision and consistency diagnostic reports. The open source software can be manipulated conveniently. The operator requires information regarding the gestational period and selects the appropriate glycaemic marker options from the menu. During operation, pressing the button "diagnosticar" on the screen will present the diagnosis and information for the follow up. d-GDM is available in Portuguese or English and can be downloaded from the Google PlayStore. A responsive web version of d-GDM is also available. The usefulness and accuracy of d-GDM was verify by field tests involving 22 subjects and 5 mobile phone brands. The approval regards user-friendliness and efficiency were 95% or higher. The GDM diagnosis were 100% correct, in this pilot test. d-GDM is a user-friendly, free software for diagnosis that was developed for mobile devices. It has the potential to contribute and facilitate the diagnosis of gestational diabetes for healthcare professionals.

Correlação entre valores de glicemia média estimada e glicemia em jejum / Relationship between values of estimated average glucose and fasting glucose

Os procedimentos de rotina para avaliação do controle glicêmico em indivíduos com diabetes mellitus (DM) são a glicemia de jejum, que reflete a concentração glicêmica no momento do teste, e a hemoglobina glicada (A1C), que traduz a glicemia dos últimos quatro meses. Recentemente tem sido recomendado o cálculo da glicemia média estimada (GME) para avaliar o controle glicêmico, pela equação GME (mg/dL) = 28,7 × HbA1C ­ 46,7. A GME é mais simples de ser interpretada pelo diabético, facilitando a compreensão do seu estado glicêmico. Neste estudo avaliamos a relação da GME com os valores da glicemia em jejum. Foram estudados 49 diabéticos (grupo DM) com três coletas de sangue cada, a intervalos de 120 dias entre as coletas, e 30 indivíduos sadios (grupo controle). As médias das três determinações de glicemia em jejum e A1C do grupo DM foram utilizadas para as análises. Os valores médios de glicemia em jejum (mg/dL), A1C (%) e GME (mg/dL) para os grupos DM e controle foram, respectivamente: 163,55, 8,38 e 193,83; e 71,0, 5,14 e 100,91. A fórmula não traz benefícios para indivíduos não diabéticos, pois superestima os valores de glicemia. Os resultados da glicemia em jejum e GME do grupo DM foram diferentes (P<0,001, Wilcoxon), com correlação (r) de 0,83 (p<0,001). Portanto, a GME tem boa correlação com a glicemia de jejum, mas seus valores podem diferir pelo fato de a GME refletir a A1C, um marcador glicêmico de longo prazo.

Serum Fluorescent Advanced Glycation End (F-AGE) products in gestational diabetes patients

ABSTRACT Objectives Advanced glycation end products (AGEs) are involved in the pathogenesis and complications of diabetes mellitus (DM). Gestational DM (GDM) is characterized by increased glycemia and oxidative stress, which are factors associated with high serum AGE concentrations. The aim of this study was to evaluate the utility of a serum fluorescence AGE (F-AGE) method as a screening tool for gestational diabetes. Subjects and methods Serum samples from 225 GDM patients and 217 healthy pregnant women (healthy controls) were diluted 50-fold in phosphate-buffered saline, and the AGEs were estimated by fluorometric analysis (λEx 350 nm/ λEm 440 nm). Results No significant (P > 0.05) differences in AGE concentrations, expressed in Arbitrary Units (UA/mL × 104), were observed in the women with GDM or in the healthy controls. Furthermore, F-AGE concentrations did not change significantly during the pregnancy (12-32 weeks of gestation). Only the GDM group had a positive correlation (r = 0.421; P < 0.001) between F-AGEs and serum creatinine concentrations. Conclusion It was not possible to distinguish women with gestational diabetes from the healthy controls on the basis of serum F-AGE concentrations.

Type 2 diabetes-associated genetic variants of FTO, LEPR, PPARg, and TCF7L2 in gestational diabetes in a Brazilian population

ABSTRACT Objective Gestational diabetes mellitus (GDM) is a metabolic disorder that shares pathophysiologic features with type 2 diabetes mellitus. The aim of this study was to investigate the association of the polymorphisms fat mass and obesity-associated (FTO) rs1421085, leptin receptor (LEPR) rs1137100, rs1137101, peroxisome proliferator-activated receptor gamma (PPARg) rs1801282, and transcription factor 7-like 2 (TCF7L2) rs7901695 with GDM. Subjects and methods 252 unrelated Euro-Brazilian pregnant women were classified into two groups according to the 2015 criteria of the American and Brazilian Diabetes Association: healthy pregnant women (n = 125) and pregnant women with GDM (n = 127), matched by age. The polymorphisms were genotyped using fluorescent probes (TaqMan®). Results All groups were in Hardy-Weinberg equilibrium. The genotype and allele frequencies of the studied polymorphisms did not show significant differences between the groups (P > 0.05). In the healthy and GDM groups, the C allele frequencies (95% CI) of the FTO rs1421085 polymorphism were 36.8% [31-43%] and 35.0% [29-41%]; the G allele frequencies (95% CI) of the LEPR rs1137100 polymorphism were 24.8% [19-30%] and 22.8% [18-28%]; the G allele frequencies (95% CI) of the LEPR rs1137101 polymorphism were 43.6% [37-50%] and 42.9% [37-49%]; the G allele frequencies (95% CI) of the PPARg rs1801282 polymorphism were 7.6% [4-11%] and 8.3% [5-12%]; and the C allele frequencies (95% CI) of the TCF7L2 rs7901695 polymorphism were 33.6% [28-39%] and 39.0% [33-45%], respectively. Conclusion The studied polymorphisms were not associated with GDM in a Brazilian population.

Screening of whole yeast free-cells and optimization of pH and temperature for fructooligosaccharides production / Seleção de células inteiras de levedura e otimização dos parâmetros pH e temperatura para a produção de fruto-oligossacarídeos

Fructooligosaccharides are catalyzed by ß­fructofuranosidase enzyme, produced by many microorganisms. However, in order to achieve a more profitable, low time -consuming process with lower cost, researchers have sought alternatives. This study aimed to select and identify yeasts able to produce fructooligosaccharides and evaluate the influence of pH and temperature on their synthesis. Yeast suspensions, solutions of 500 g L-1 sucrose and three values of pH (4.5, 5.5, and 6.5) and temperature (40, 50, and 60ºC) were tested. Yeast species were identified by molecular techniques. Among 141 yeast isolates from grapes, 65 were able to synthesize fructooligosaccharides. The maximum concentration of fructooligosaccharides was 4.8% (w v-1), and Saccharomyces cerevisiae 222 produced 1-kestose and nystose.

Fruto-oligossacarídeos são catalisados pelas enzimas ß­fructofuranosidase, produzida por muitos micro -organismos. No entanto, para obter processos mais rentáveis, de menor custo e tempo, pesquisadores têm procurado alternativas. Este trabalho tem objetivo de selecionar e identificar leveduras capazes de produzir fruto-oligossacarídeos e avaliar a influência do pH e da temperatura na sua síntese. Suspensões de leveduras, soluções de sacarose de 500 g L- 1 e três valores de pH (4,5, 5,5 e 6,5) e de temperaturas de (40, 50 e 60ºC) foram utilizados. As espécies de leveduras foram identificadas por técnicas moleculares. De 141 isolados de leveduras de uvas, 65 foram capazes de sintetizar fruto-oligossacarídeos. A concentração máxima de fruto-oligossacarídeos foi de 4,8% (p v-1), e a levedura Saccharomyces cerevisiae 222 produziu 1-cestose e nistose.

The rs10885122 polymorphism of the adrenoceptor alpha 2A (ADRA2A) gene in Euro-Brazilians with type 2 diabetes mellitus

Objective To investigate the association of the rs10885122G>T polymorphism in the ADRA2A gene in a Euro-Brazilian sample of healthy (controls) and type 2 diabetic (T2D) subjects. Subjects and methods We used fluorescent probes (TaqMan) to genotype 241 subjects, that is, 121 healthy and 120 T2D subjects, who were classified based on the Brazilian Diabetes Association (2013) and American Diabetes Association (2014) criteria. Results The genotype and allele frequencies showed no significant (P > 0.05) difference between the two studied groups. The minor allele (T) frequencies (95%CI) for rs10885122 were 19% (14-24%) and 20% (15-26%) for healthy and T2D groups, respectively. Carriers of the T allele (genotypes GT+TT) were significantly associated (P = 0.016) with approximately a 7-kg body weight reduction compared with the genotype GG, which was only found in the T2D group. Conclusion The rs10885122G>T polymorphism of the ADRA2A gene was not associated with T2D in Euro-Brazilians, and carriers of the T allele had lower body weight in the presence of T2D. Arch Endocrinol Metab. 2015;59(1):29-33 .

The uptake of different iron salts by the yeast Saccharomyces cerevisiae

Yeasts can be enriched with microelements, including iron; however, special physicochemical conditions are required to formulate a culture media that promotes both yeast growth and iron uptake. Different iron sources do not affect biomass formation; however, considering efficacy, cost, stability, and compatibility with Saccharomyces cerevisiae metabolism, ferrous sulphate is recommended.

RAGE receptor and its soluble isoforms in diabetes mellitus complications / O receptor RAGE e suas isoformas solúveis nas complicações do diabetes mellitus

Chronic hyperglycemia, which is present in all types of diabetes, increases the formation of advanced glycation end-products (AGEs). The interaction of AGEs with receptor of advanced glycation end-products (RAGE) initiates a cascade of pro-inflammatory and pro-coagulant processes that result in oxidative stress, stimulating the formation and accumulation of more AGE molecules. This cyclic process, denominated metabolic memory, may explain the persistency of diabetic vascular complications in patients with satisfactory glycemic control. The RAGE found in several cell membranes is also present in soluble isoforms (esRAGE and cRAGE), which are generated by alternative deoxyribonucleic acid splicing or by proteolytic cleavage. This review focuses on new research into these mediators as potential biomarkers for vascular complications in diabetes.

A hiperglicemia crônica, presente em todas as formas de diabetes, favorece a formação de produtos finais de glicação avançada (AGEs). A interação de AGEs com o receptor de produtos finais glicosilados (RAGE) inicia uma cascata de processos pró-inflamatórios e pró-coagulantes que resultam em estresse oxidativo, o qual estimula a formação e o acúmulo de maior quantidade de moléculas de AGEs. Esse processo cíclico, denominado memória metabólica, pode explicar por que, mesmo após um período de bom controle glicêmico, as complicações vasculares associadas ao diabetes não regridem. O RAGE fixado nas membranas de várias células também está presente em isoformas solúveis (esRAGE e cRAGE), geradas por processamento alternativo do ácido desoxirribonucleico (DNA) ou por clivagem proteolítica. Esta revisão aborda os novos estudos sobre a função desses mediadores como potenciais biomarcadores para as complicações vasculares no diabetes.

Butyrylcholinesterase and diabetes mellitus in the CHE2 C5- and CHE2 C5+ phenotypes / Butirilcolinesterase e diabetes melito nos fenótipos CHE2 C5- e CHE2 C5+

OBJECTIVE:To investigate the relationship between butyrylcholinesterase (BChE) activities (total and band specific) and diabetes mellitus. SUBJECTS AND METHODS: BChE activities (BChEA, AC 4/5, AC OF and RC5) were analyzed in 101 type 1 (DM1) and in 145 type 2 (DM2) diabetic patients, in relation to phenotype, weight and incidence of metabolic syndrome (MS) in these patients. The C4/5 and C5 complex were separated from other molecular forms (C OF) using an acid agar gel. RESULTS: The BChE activity (BChEA) and the absolute activities of C4/5 (AC4/5) and C OF (AC OF) showed a high positive correlation coefficient to weight in the CHE2 C5- group, while the relative activity of C5 complex (RC5) showed a negative correlation to weight. CONCLUSIONS: The present study suggests that the positive correlation of the BChE activities to diabetes mellitus and to insulin resistance may depend on the CHE2 locus variability. High values of BChE activities were associated with insulin resistance only in CHE2 C5- diabetic patients, while in CHE2 C5+ diabetic patients, the presence of C5 complex, especially in a relatively high proportion, leads to less fat storage and better protection against metabolic syndrome.

OBJETIVO: Investigar a associação entre as atividades (total e banda específica) da butirilcolinesterase (BChE) e diabetes melito. SUJEITOS E MÉTODOS: As atividades da BChE (BChEA, AC4/5, AC OF e RC5) foram analisadas em 101 pacientes diabéticos do tipo 1 (DM1) e 145 do tipo 2 (DM2) em relação aos fenótipos, ao peso e à incidência da síndrome metabólica. Os complexos C4/5 e C5 foram separados das outras formas moleculares (C OF), usando gel de ágar ácido. RESULTADOS: A atividade da BChE (BChEA) e as atividades absolutas de C4/5 (AC4/5) e de C OF (AC OF) mostraram altos coeficientes de correlações positivos com peso no grupo de CHE2 C5-, enquanto a atividade relativa do complexo C5 (RC5) mostrou correlação negativa com o peso. CONCLUSÕES: O presente estudo sugere que as correlações positivas das atividades da BChE com diabetes melito e com a resistência à insulina podem depender da variabilidade do loco CHE2. Altos valores nas atividades da BChE estão associados com a resistência à insulina somente nos pacientes diabéticos CHE2 C5-, enquanto nos pacientes diabéticos CHE2 C5+ a presença do complexo C5, especialmente em alta proporção relativa, leva a um menor estoque de gordura e à maior proteção contra a síndrome metabólica.

Controle da qualidade na coleta do espécime diagnóstico sanguíneo: iluminando uma fase escura de erros pré-analíticos / Quality control in the collection of diagnostic blood specimens: illuminating a dark phase of preanalytical errors

INTRODUÇÃO: A fase pré-analítica é a responsável por mais de dois terços de todos os erros atribuídos ao laboratório e contempla poucos procedimentos rotineiros para a detecção de não conformidades. Nesta fase, os procedimentos envolvendo a flebotomia, críticos para a obtenção do espécime diagnóstico, são pouco estudados no que diz respeito às principais fontes de erro, bem como aos procedimentos relacionados com o processo de controle da qualidade. OBJETIVOS: Propor uma ferramenta para averiguação de falhas na fase pré-analítica e estabelecer indicadores da qualidade, com ênfase nos procedimentos de coleta do espécime diagnóstico sanguíneo, visando monitorar potenciais fontes de erro nesta etapa. MATERIAIS E MÉTODOS: Foram observados os procedimentos de flebotomia empregados em 10 laboratórios clínicos da cidade de São Paulo, todos com programa de qualidade estabelecido. Os erros que apresentaram frequência superior a 80 por cento foram selecionados para elaboração de uma lista de verificação, com a finalidade de avaliar o desempenho de flebotomistas. Normas e recomendações estabelecidas por instituições nacionais e internacionais, como Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA), Sociedade Brasileira de Patologia Clínica/Medicina Laboratorial (SBPC/ML) e Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), serviram de referência para a elaboração da lista de verificação. RESULTADOS: A lista de verificação proposta aborda cinco pontos do processo de flebotomia: tempo de aplicação do torniquete, número de flebotomistas que solicitam ao paciente execução da constrição do músculo do antebraço previamente à coleta, fricção do músculo do antebraço no processo de antissepsia, sequência correta ou não de utilização dos tubos de coleta e avaliação da homogeneização adequada ou não do espécime diagnóstico coletado. CONCLUSÃO: A avaliação do processo de flebotomia é parte essencial no planejamento da qualidade no laboratório. A lista de verificação...

BACKGROUND: The preanalytical phase is responsible for more than two thirds of all errors attributed to the clinical laboratory and it has only a few routine procedures for the detection of nonconformity. In this phase, the procedures involving phlebotomy, critical to the obtainment of diagnostic blood specimen, are poorly studied with regard to major sources of errors and procedures related to quality control process. OBJECTIVES: The aim of this work is to propose a tool for finding failures in the preanalytical phase and to establish quality indicators, with emphasis on procedures for the collection of diagnostic blood specimens, in order to monitor potential sources of error in this phase. MATERIALS AND METHODS: We evaluated phlebotomy procedures employed in ten clinical laboratories in São Paulo city, Brazil. All of them with established quality program. The errors that had a frequency higher than 80 percent were selected to be part of a checklist aiming to evaluate the performance of phlebotomists. Standards and recommendations established by national and international institutions, such as ANVISA, SBPC/ML and CLSI, served as reference to elaborate the checklist. RESULTS: The proposed checklist covers five points of phlebotomy procedures: tourniquet application time, number of phlebotomists that ask patients to clench forearm muscle prior to collection, friction of the forearm muscle in antisepsis process, correct or incorrect sequence of blood collecting tubes and evaluation of accurate or inaccurate homogenization of collected blood specimens. CONCLUSIONS: Phlebotomy evaluation is an essential part of the quality planning in clinical laboratories. The proposed checklist allows error detection in the preanalytical phase, establishment of quality indicators and implementation of corrective and preventive actions with cost effectiveness and improvement in process efficiency.

Variabilidade biológica em parâmetros hematológicos / Biological variability in hematological quantities

A variabilidade biológica é a variação natural, de ocorrência fisiológica, própria do indivíduo, independente das variáveis pré analíticas. As variações analíticas intraindividual e interindividual foram estimadas para 17 indivíduos supostamente normais, em um período de 6 semanas (duas amostras por semana, N=12) para parâmetros que compõem o hemograma. Os valores médios, em termos de coeficiente de variação para a variabilidade biológica intrindividual (CV) e interindividual (CVg).

Efeitos da terapia de reposição hormonal sobre os níveis dos lípides e da ativaidade da butirilcolinesterase no soro / Effects of hormonal replacement therapy on the lipid levels and on butyrylcholinesterase activity in serum

A butirilcolinesterase (BChE, EC 3.1, 1.8) é uma enzima produzida pelo fígado e com função desconhecida. A atividade da BChE (ABChE) tem sido negativamente correlacionada com os níveis de estrogênios e positivamente com os de lípedes séricos. Mulheres climatéricas frequentemente apresentam níveis aumentados dos lípides séricos (colesterol total e LDL-colesterol), levando a um maior risco de doença arterial coronariana (DAC). A terapia de reposição hormonal (TRH) causa mudanças no perfil lípidico, em uma direção potencialmente anti-aterogênica. O objetivo deste estudo foi verificar as correlações da ABChE em mulheres climatéricas, antes e após TRH. Os níveis de colesterol total(CT), LDL-colesterol (LDL-C), triglicérides (TG), estradiol (E) e do hormônio folículo estimulante (FSH), foram analisados. Amostras de soros (jejum de 12 horas) de trinta e duas mulheres climatéricas (52,7 +- 6,3 anos), coletadas antes e após TRH foram examinadas por vários protocolos, durante aproximadamente 3 meses. A ABChE mostrou uma redução média de aproximadamnte 6,5% após a TRH (p< 0,001). Os níveis de CT e LDL-C se apresentaram positivamnte (p<0,05) correlacionados com a ABChE antes e após a TRH. Os níveis de TG e E, mostraram correlações positiva e negativa, respectivamente com a ABChE (p<0,05), somente antes da TRH. O FSH não apresentou correlação com a BBChE. O nível de LDL-C, um marcador de DAC, mostrou significante redução (p= 0,01) após TRH em concordância com a ABChE. Esses dados enfatizam a relação entre a ABChE e os lípides séricos, e apoiam a hipótese de uma potencial função da BChE no metabolismo dos lípides, como sugerem outros autores.

Cistatina C: um novo marcador para a filtração glomerular comparada ao clearance de creatinina e a creatinina sérica / Cystatin C: a new marker for glomerular filtration rate compared to creatinine clearance and serum creatinine

A Cistatina C é uma proteína de baixo peso molecular (- 13 kDa) produzida constantemente em todas as células nucleadas. Esta molécula é livremente filtrada no glomérulo renal, reabsorvida e catabolizada no túbulo proximal, sendo os níveis séricos dependentes e indicadores da função de filtração glomerular. Esta revisão aborda o desempenho da Cistatina C em relação aos testes usualmente empregados na rotina laboratorial para avaliação da função renal. Verifica-se que a Cistatina C é um marcador confiável da filtração glomerular mais sensível e específico que as determinações de creatinina sérica e clearance de creatinina, e pode ser uma alternativa atrativa, especialmente quando a população pediátrica é considerada.

Mucoproteína versus alfa-1-glicoproteína ácida: o que quantificar? / Mucoprotein versus alpha-1-acid glycoprotein: what should be measured?

A quantificaçäo sérica da alfað1ðglicoproteína (GPA) ácida é útil no diagnóstico e no acompanhamento dos processos agudos resultantes de múltiplas causas. Esta proteína também pode ser estimada pela quantificaçäo da mucoproteína (Muco), ensaio que reflete as glicoproteínas com elevado teor de açúcar, entre as quais a GPA é majoritária. O objetivo deste trabalho é verificar a correlaçäo e a performance analítica das determinações de mucoproteína (Muco) e alfað1ðglicoproteína ácida (GPA), propondo uma equaçäo de regressäo linear. Amostras de soros e 540 pacientes, com idades entre 10 e 79 anos (média de 34,6), predominando mulheres (71,3 por cento), foram analisadas simultaneamente para Muco (Winzler, manual com reagentes próprios) e GPA (imunoturbidimetria automatizada, Roche; Cobas mira). A análise de regressäo, fixando a Muco como variável dependente, apresentou Muco (mg/dl em tirosina) = 0,031 x GPA (mg/dl) + 0,8 (r = 0,91); e, fixando o intercepto em zero, Muco = 0,039 x GPA (r = 0,98). A imprecisäo interensaio foi de 23,4 por cento e 5,2 por cento (coeficiente de variaçäo), respectivamente, para Muco e GPA. Conclusäo: a elevada variabilidade analítica da quantificaçäo da mucoproteína pelo método de Winzler recomenda que este ensaio seja substituído pela dosagem da alfað1ðglicoproteína ácida. Quanto necessário, recomendamos estimar a mucoproteína, quantificando a alfað1ðglicoproteína ácida com ensaios de mesmo desempenho que o do utilizado neste trabalho, e usar a equaçäo de regressäo AGP (mg/dl) x 0,039 = Muco (mg/dl em tirosina)